各类高效液相色谱法：
(一)液固吸附色谱法（LSC）流动相为液体，固定相为固体吸附剂；1．分离机制：利用溶质分子占据固定相表面吸附活性中心能力差异；分离前提：K不等或k不等；2．固定相：与LC比，固定相粒径不同（<10μm）；3．流动相：底剂（烷烃）+有机极性调节剂；例：正己烷或庚烷+氯仿；4．影响K的因素：与固定相性质和流动相性质有关；溶质分子极性↑，洗脱能力↓，k↑，tR↑；溶剂系统极性↑，洗脱能力↑，k↓，tR↓；注：调节溶剂极性，可以控制组分的保留时间；5．出柱顺序：强极性组分后出柱，弱极性组分先出柱；6．硅胶吸水量↑，LSC→LLC硅胶含水量较小，吸附色谱，硅胶极性较大；硅胶含水量>17% ，分配色谱，硅胶失活→载体；吸附的水→固定液
(二)液-液分配色谱法（LLC）1．分离机制：利用组分在两相中溶解度的差异2．固定相：载体+固定液（物理或机械涂渍法）缺点：系统内部压力大，易流失，不实用。固定液-极性→NLLC，固定液-非极性→RLLC。3.①正相色谱-固定液极性>流动相极性（NLLC）极性小的组分先出柱，极性大的组分后出柱：适于分离极性组分；②反相色谱-固定液极性<流动相极性（RLLC）极性大的组分先出柱，极性小的组分后出柱：适于分离非极性组分；
(三)化学键合相色谱法（BPC）1.化学键合相 （1）分离机制：分配+吸附（以LLC为基础）；（2）特点：1）不易流失；2）热稳定性好；3）化学性能好；4）载样量大； 5）适于梯度洗脱；2.反相键合相色谱（1）分离机制：疏溶剂理论；正相-流动相与溶质排斥力强，作用时间↑，K↑，组分tR↑；反相-流动相与溶质排斥力弱，作用时间↓，K↓，组分tR↓；（2）固定相：极性小的烷基键合相；C8柱，C18柱（ODS柱-HPLC约80%问题）；（3）流动相：极性大的甲醇-水或乙腈-水；流动相极性>固定相极性；底剂+有机调节剂（极性调节剂）；例：水+甲醇，乙腈，THF；（4）流动相极性与k的关系：流动相极性↑，洗脱能力↓，k↑，组分tR↑（5）出柱顺序：极性大的组分先出柱；极性小的组分后出柱；（6）适用：非极性~中等极性组分（HPLC 80%问题）3.正相键合相色谱(1)分离机制：溶质分子与固定相之间定向作用力、诱导力、或氢键作用力(2)固定相：极性大的氰基或氨基键合相；(3)流动相：极性小（同LSC）；底剂+有机极性调节剂；例：正己烷+氯仿-甲醇，氯仿-乙醇；(4)流动相极性与K的关系：流动相极性↑，洗脱能力↑，组分tR↓，k↓；(5)出柱顺序：结构相近组分，极性小的组分先出柱，极性大的组分后出柱；(6)适用：氰基键合相与硅胶的柱选择性相似（极性稍小），分离物质也相似；氨基键合相与硅胶性质差别大，碱性，分析极性大物质、糖类等；4.离子对色谱和离子抑制色谱，反相离子对色谱法（IPC或PIC）反相色谱中，在极性流动相中加入离子对试剂，使被测组分与其中的反离子形成中性离子对，增加K和tR，以改善分离；(1)离子对试剂：烷基磺酸钠→分析碱，四丁基季胺盐→分析酸。(2)影响K的因素: a．与m的极性有关（同反相色谱）；b．与R的链长有关：R↑长，极性↓小，tR↑，k↑；(3)适用：较强的有机酸、碱；反相离子抑制色谱；在反相色谱中，通过加入缓冲溶液调节流动相pH值，抑制；组分解离，增加其K和tR，以达到改善分离目的；1）离子抑制剂：弱酸、弱碱性物质； pH一定的缓冲溶液；2）K的影响因素：与流动相极性有关，还与pH值有关；选择流动相：应同时考虑极性及pH值；酸性物质-加入酸HAc，tR↑，K↑；碱性物质-加入碱NH3·H2O，tR↑，K↑； 调节pH范围：3.0~8.0；pH>8.0破坏键合相与载体的结合；pH<3.0腐蚀柱子；3）适用：极弱酸碱物质；pH=3~7弱酸；pH=7~8弱碱；两性化合物；
---本文摘自《实验与分析》
客服一
