1 与气相色谱相比液相色谱的优点：液相色谱法不受样品挥发性和热稳定性及相对分子质量的限制，只要求把样品制成溶液即可，非常适合于分离生物大分子、离子型化合物，不稳定的天然产物以及其他各种高分子化合物等。此外，液相色谱的流动相不仅起到使样品沿色谱柱移动的作用，而且与固定相一样，与样品分子发生选择性的相互作用，这就为控制和改善分离条件提供了一个额外的可变因素。而气相色谱法采用的流动相是惰性气体，对组分没有亲和力，仅起运载作用。
2 流动相使用前必须脱气。常用的脱气方法有：低压脱气法（电磁搅拌、水泵抽空，可同时加热或向溶剂吹氮气）、吹氦气脱气法和超声波脱气法等。
3 梯度洗脱：用两种（或多种）不同极性的溶剂，在分离过程中按一定程序连续改变流动相中溶剂的配比和极性，通过流动相中极性的变化来改变被分离组分的分离因素，以提高分离效果。
4 高压梯度（内梯度）：特点是先加压后混合。将溶剂用高压泵增压以后输入色谱系统的梯度混合室，加以混合后送入色谱柱。低压梯度（外梯度）：特点是先混合后加压。在常压下预先按一定的程序将溶剂混合后再用泵输入色谱柱。
5 进样系统要求：良好的密封性，最小的死体积，最好的稳定性，进样时对色谱系统压力、流量影响较小。
6 分离系统：色谱柱是实现分离的核心部件。由柱管和固定相组成。柱管为直型不锈钢管。一般色谱柱长5~30 cm，内径4~5 mm，凝胶色谱柱内径3~12 mm，而制备色谱柱内径则可达25 mm。一般淋洗溶剂在进入色谱分离柱之前，先通过前置柱。HPLC柱的填料颗粒粒径一般约为3~10 m，填充常采用匀浆法。色谱柱的发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。
7 检测系统：作用——用来连续监测经色谱柱分离后的流出物的组成和含量变化的装置。紫外-可见吸收检测器、光电二极管阵列检测器、示差折光检测器、荧光检测器、电化学检测器。
8 高效液相色谱法对流动相的要求：流动相不与色谱柱发生不可逆化学变化，以保持柱效或柱子的保留性质较长时间不变；对待测样品有足够的溶解能力；与所用检测器相匹配；粘度尽可能小，以获得较高的柱效；流动相纯度要高，价格便宜，毒性小。
9 离子交换色谱法原理：离子交换色谱法的固定相是离子交换树脂，流动相是水溶液，它是利用待测样品中各组分离子与离子交换树脂的亲和力的不同而进行分离的。
10 离子交换色谱法流动相：水的缓冲溶液。阴离子离子交换树脂作固定相，采用酸性水溶液；阳离子离子交换树脂作固定相，采用碱性水溶液；应用：离子及可离解的化合物，氨基酸、核酸等。
11 凝胶色谱法流动相：能溶解样品且与凝胶相似(润湿凝胶并防止吸附作用)、粘度小(增加扩散速度)。常用四氢呋喃、苯、氯仿、水等。
12 影响分离的因素与提高柱效的途径:
（1）液体的黏度比气体大一百倍，密度为气体的一千倍左右，故降低传质阻力是提高柱效主要途径。
（2）由速率方程，降低固定相粒度可提高柱效。
（3）液相色谱中，不可能通过增加柱温来改善传质。
（4）恒温改变淋洗液组成、极性是改善分离的最直接的因素。
（5）流速大于0.5 cm/s时, H～u曲线是一段斜率不大的直线。降低流速，柱效提高不是很大。但在实际操作中，流量仍是一个调整分离度和出峰时间的重要可选择参数。
（6）气相色谱中的固定液原则上都可以用于液相色谱，其选用原则与气相色谱一样。但在高效液相色谱中，分离柱的制备是一项技术要求非常高的工作，一般很少自行制备。
---本文摘自实验与分析
客服一
